色譜柱正確的清洗和再生小技巧分享

　　一、色譜柱的清洗方法

　　1.以乙腈:水(1:9,v→乙腈→乙腈水(1:9,v依次沖洗,然后進(jìn)行使用。

　　2.多次使用后某些樣品可能會(huì)吸附到入口篩板或填料上引起柱壓升高伴隨峰形展寬的現(xiàn)象。此時(shí),可將色譜柱與檢測(cè)器斷開,將色請(qǐng)柱反接后進(jìn)行沖洗。

　　二、色譜柱的再生方法

　　1.一般污染再生:

　　2.蛋白污染再生:0.1的水溶液異丙醇(4:1,v→乙腈:異丙醇(1:2,wv內(nèi)含0.1%)一水:異丙1:4,VM分別沖洗10~20倍柱體積。(注意每項(xiàng)過渡時(shí),壓力的控制,壓力建議控制在1500psi以下,根據(jù)柱子的具體情況請(qǐng)自己優(yōu)化流速)。

　　三、色譜柱的應(yīng)用：

　　譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于Hplc的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對(duì)于同系物分析，只要500即可;對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。