HPLC液相色譜儀技術(shù)入門者須知

　　HPLC液相色譜儀的技術(shù)原理：

　　分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中，K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù) (或稱交換系數(shù))，凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。

　　在條件(流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等)一定，樣品濃度很低時(shí)(Cs、Cm很小)時(shí)，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時(shí)色譜峰為拖尾峰;而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時(shí)色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進(jìn)樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時(shí)，才能獲得正常峰。

　　HPLC液相色譜儀色譜的特點(diǎn)：

　　高壓--壓力可達(dá)150~300 kg/cm。色譜柱每米降壓為75 kg/cm以上。

　　高速--流速為0.1~10.0 mL/min。

　　--塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。

　　高靈敏度--紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。

　　HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn):

　　速度快--通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。

　　分辨率高--可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到合適分離效果。

　　靈敏度高--紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。

　　色譜柱可反復(fù)使用--用一根色譜柱可分離不同的化合物。

　　樣品量少，容易回收--樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。